Práctico: extracción y separación de pigmentos fotosintéticos

Objetivo

- Extraer los pigmentos fotosintéticos de diferentes vegetales y separarlos mediante la

técnica de cromatografía sobre papel.

Agrupamiento y Material

Nivel : C. BÁSICO / Bachillerato	Agrupamiento: 2 Alumnos por equipo
Material común: - 2 bandejas de hierba cortada - 2 bandejas de arena fina - 2 espátulas - Alcohol	Material por equipo: - Mortero - Embudo - Tubo de ensayo de diámetro grande - Gradilla - Probeta - Tijeras - Papel de filtro circular (diámetro 10 cm) - Tira de cromatografía (2 x 15 cm)

Fundamento

Los pigmentos fotosintéticos presentan diferente solubilidad, lo que permite su extracción y

posterior separación cuando una disolución de los mismos asciende por una tira de papel

poroso: los más solubles se desplazarán más pues acompañarán al disolvente a medida que éste

ascienda por el papel, quedando retrasados los menos solubles.

Los pigmentos que encontraremos en las plantas superiores y que fácilmente podremos

identificar son:

- Clorofila a: tiene un color verde.

- Clorofila b: de color verde o verde-limón.

- â-carotenos: de coloración naranja.

- Xantofilas: de coloración amarillo claro.

Método

A) Extracción de pigmentos

- Coloca en el mortero 30 ml de alcohol y una pizca de arena. Tritura los fragmentos

vegetales hasta lograr un líquido de color verde intenso.

- Coloca el papel de filtro sobre el embudo y éste sobre el tubo de ensayo. Filtra el

contenido del mortero.

- Desecha el papel de filtro con su contenido y recoge el filtrado que contendrá los

pigmentos fotosintéticos.

B) Separación de pigmentos

- Introduce la tira de papel en el tubo de forma que el extremo quede empapado en la

solución de pigmentos.

- Coloca en oscuridad y deja reposar unas horas hasta lograr una buena separación de los

pigmentos.

- Retira la tira de cromatografía y procede a su estudio.

Resultados

- Dibuja en la silueta adjunta las diferentes bandas de color que has obtenido en la tira de

cromatografía e identifica cada pigmento.

- ¿Por qué has empleado alcohol para extraer los pigmentos? ¿Cuáles te parece que se

disuelven mejor?

Usamos alcohol porque los pigmentos fotosintéticos son moléculas más solubles en

disolventes orgánicos (por ejemplo, el alcohol) que en agua.

- ¿Por qué crees que esta técnica recibe el nombre de cromatografía?

Cromatografía (término introducido por Mikhail Tswett en 1906) es una palabra derivada

de las griegas “chroma” , color, y “graphein” , dibujar o escribir. La cromatografía es una

técnica de separación de mezclas de sustancias que se hacen visibles por el desarrollo de

bandas de distinto color que van apareciendo sobre la tira del papel que se utiliza como

soporte.

- ¿Cuál te parece que es el fundamento de la cromatografía?

El fundamento es la diferente solubilidad de los pigmentos en el alcohol.

El extremo de la tira de papel está sumergido en la disolución que contiene la mezcla de

pigmentos. A medida que el disolvente y los pigmentos ascienden por capilaridad por el

papel mantenido en posición vertical, se produce la distribución de los mismos en función de

su diferente solubilidad en alcohol. Los pigmentos más solubles acompañarán al disolvente

que sube y se moverán con el frente hacia el extremo del papel. Los pigmentos menos

solubles permanecerán cerca de la base del papel. Es decir, los pigmentos se separan al

recorrer distintas distancias desde el origen.

Observaciones

- La hierba es un material adecuado, dando mejor resultado si se corta previamente en

pequeños trozos para facilitar la extracción de los pigmentos.

- Si la arena está lavada previamente y es de alto contenido en cuarzo, se consigue mejor

extracción.

- Los pigmentos son fotosensibles por lo que se obtienen mejores resultados si el ascenso

por la tira de papel y el secado posterior se produce en oscuridad (por ejemplo, dentro

del armario).

- Al finalizar la práctica, es conveniente que el profesorado vigile el proceso cada cierto

tiempo y extraiga las tiras de aquellos tubos de ensayo en los que ya se haya producido la

separación; se corre el riesgo en caso contrario de que todos los pigmentos sean

arrastrados por el frente del disolvente y se “amontonen” en el extremo de la tira,

perdiéndose la separación previamente conseguida.