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lunes, 15 de octubre de 2012

Práctico: observación de mitosis en células de cebolla

Objetivo

- Observar y reconocer las diferentes fases de la mitosis.

Agrupamiento y Material

Nivel: C. BÁSICO/Bachillerato

Agrupamiento: 3 Alumnos por equipo

Material común:

- Cebollas con ápices radiculares

- Orceína A y orceína B

- Mechero

Material por equipo:

- Microscopio

- Porta y cubre

- Vidrio de reloj

- Pinzas de madera

- Tijeras

- Pinzas de disección

Fundamento

La mitosis es el mecanismo de división celular en eucariotas que subyace a cualquier fenómeno

de proliferación celular. La observación microscópica de los cromosomas durante la mitosis es

sencilla cuando se preparan extensiones de tejidos meristemáticos, particularmente si se

trata de meristemos radiculares de Allium cepa (cebolla), por la alta tasa de mitosis de este

tejido, el tamaño de sus células y la facilidad para preparar extensiones celulares sobre un

porta.

La tinción del material nuclear con orceína acética permite observar los cromosomas en

diferentes momentos del ciclo mitótico. La ordenación cronológica de estas figuras permite

reconstruir los acontecimientos que tienen lugar en el núcleo celular durante el proceso, como

si de una secuencia fotográfica se tratara, e identificar cada una de las fases que

tradicionalmente se establecen en la mitosis (profase, metafase, anafase y telofase).

Método

- Corta con las tijeras el ápice de una raíz de cebolla (unos tres milímetros) y colócalo en un

vidrio de reloj.

- Añade unas gotas de orceína A de forma que el ápice quede bien cubierto y calienta

suavemente a la llama hasta que se desprendan vapores. Evita la ebullición de la orceína

y procura que el ápice de raíz no se quede seco.

- Retira de la llama y mantén el ápice sumergido en el colorante (orceína A) durante 10

minutos.

- Coloca la raicilla sobre un portaobjetos, añade una gota de orceína B y espera dos o tres

minutos.

- Coloca un cubreobjetos y realiza un “splash” presionando suavemente con el dedo.

- Observa al microscopio, colocando 400 aumentos como mínimo.

Resultados

- ¿Por qué es necesario hacer un splash para observar al microscopio?

La técnica del splash o aplastamiento permite extender sobre un porta una masa de células

que, de otro modo, formarían un cuerpo con células en diferentes capas, lo que dificultaría

enormemente la observación microscópica célula a célula.

- Haz dibujos de las diferentes fases de la mitosis que hayas observado.image

Observaciones

- La mayoría de las cebollas que se adquieren en los centros comerciales han recibido algún

tratamiento para impedir su germinación durante la comercialización, así que resulta muy

difícil inducir la formación de raicillas en el laboratorio, ni tan siquiera utilizando productos

enraizadores. Para evitar este problema lo mejor es emplear cebollas procedentes de

cultivos biológicos o de agricultores que no empleen estos productos.

- Los tiempos de tinción indicados en el método no deben ser acortados, porque se corre el

riesgo de teñir los núcleos, pero no los cromosomas, con lo que no se observarían figuras de

mitosis. Las disoluciones de orceína se preparan según la fórmula que figura en el capítulo

dedicado a la preparación de reactivos y colorantes de uso común en el laboratorio.

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